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考研生物化學複習筆記整理

2018考研生物化學複習筆記整理

2018考研複習拉開序幕,考生們可結合西綜生物化學複習筆記進行全面的專業課複習,為以後的複習打下堅實的基礎。

一、蛋白質結構與功能關係

1、蛋白質一級結構是空間構象和特定生物學功能的基礎。一級結構相似的多肽或蛋白質,其空間構象以及功能也相似。

尿素或鹽酸胍可破壞次級鍵

β-巰基乙醇可破壞二硫鍵

2、蛋白質空間結構是蛋白質特有性質和功能的結構基礎。

肌紅蛋白:只有三級結構的單鏈蛋白質,易與氧氣結合,氧解離曲線呈直角雙曲線。

血紅蛋白:具有4個亞基組成的四級結構,可結合4分子氧。成人由兩條α-肽鏈(141個氨基酸殘基)和兩條β-肽鏈(146個氨基酸殘基)組成。在氧分壓較低時,與氧氣結合較難,氧解離曲線呈S狀曲線。因為:第一個亞基與氧氣結合以後,促進第二及第三個亞基與氧氣的結合,當前三個亞基與氧氣結合後,又大大促進第四個亞基與氧氣結合,稱正協同效應。結合氧後由緊張態變為鬆弛態。

二、蛋白質的理化性質

1、蛋白質的兩性電離:蛋白質兩端的氨基和羧基及側鏈中的某些基團,在一定的溶液PH條件下可解離成帶負電荷或正電荷的基團。

2、蛋白質的沉澱:在適當條件下,蛋白質從溶液中析出的現象。包括:

a.丙酮沉澱,破壞水化層。也可用乙醇。

b.鹽析,將硫酸銨、硫酸鈉或氯化鈉等加入蛋白質溶液,破壞在水溶液中的穩定因素電荷而沉澱。

3、蛋白質變性:在某些物理和化學因素作用下,其特定的空間構象被破壞,從而導致其理化性質的改變和生物活性的喪失。主要為二硫鍵和非共價鍵的破壞,不涉及一級結構的改變。變性後,其溶解度降低,粘度增加,結晶能力消失,生物活性喪失,易被蛋白酶水解。常見的導致變性的因素有:加熱、乙醇等有機溶劑、強酸、強鹼、重金屬離子及生物鹼試劑、超聲波、紫外線、震盪等。

4、蛋白質的紫外吸收:由於蛋白質分子中含有共軛雙鍵的'酪氨酸和色氨酸,因此在280nm處有特徵性吸收峰,可用蛋白質定量測定。

5、蛋白質的呈色反應

a.茚三酮反應:經水解後產生的氨基酸可發生此反應,詳見二、3

b.雙縮脲反應:蛋白質和多肽分子中肽鍵在稀鹼溶液中與硫酸酮共熱,呈現紫色或紅色。氨基酸不出現此反應。蛋白質水解加強,氨基酸濃度升高,雙縮脲呈色深度下降,可檢測蛋白質水解程度。

三、蛋白質的分離和純化

1、沉澱,見六、2

2、電泳:蛋白質在高於或低於其等電點的溶液中是帶電的,在電場中能向電場的正極或負極移動。根據支撐物不同,有薄膜電泳、凝膠電泳等。

3、透析:利用透析袋把大分子蛋白質與小分子化合物分開的方法。

4、層析:

a.離子交換層析,利用蛋白質的兩性遊離性質,在某一特定PH時,各蛋白質的電荷量及性質不同,故可以透過離子交換層析得以分離。如陰離子交換層析,含負電量小的蛋白質首先被洗脫下來。

b.分子篩,又稱凝膠過濾。小分子蛋白質進入孔內,滯留時間長,大分子蛋白質不能時入孔內而徑直流出。

5、超速離心:既可以用來分離純化蛋白質也可以用作測定蛋白質的分子量。不同蛋白質其密度與形態各不相同而分開。